СЕРЕБРЕНИЯ МЕТОДЫ

СЕРЕБРЕНИЯ МЕТОДЫ (см. также Импрегнация) соперничают в микроскоп, технике с красочными. Можно различать две категории См.: старые методы в применении к свежим переживающим тканям и более новые на тканях с предварительной обработкой их.—Примером первой категории может служить обработка раствором ляписа однослойного эпителия. Редукция идет здесь в промежутках между клетками, отчего получаются черные, извитые линии в форме сети и негативный рисунок самих клеток. Берут напр. какой-нибудь перепончатый орган (брыжейку, перикард) у только-что убитого животного, растягивают на пробке или восковой пластинке, укрепляют ежевыми иглами и погружают в 1%-ный или более слабый раствор ляписа. В течение 1—10 мин. появляется молочного цвета муть, тогда ополаскивают препарат дест. водой и выставляют в белой, лучше фарфоровой, наполненной дест. водой чашке на свет. Наступает побурение— признак редукции; после того переносят в дест. воду (прибавив до этого 2 зернышка поваренной соли) 70%-ный и 90%-ный спирт. В кровеносные сосуды, легкое, серозные полости и тому подобные можно вводить вслед за раствором ляписа теплый раствор желатины или последняя впрыскивается в смеси с раствором ляписа. В роговице межуточные клетки (клетки переднего эпителия перед этим удаляются действием пара) дают иногда позитивный, иногда негативный рисунок, тотально импрегнируясь вместе с отростками. На миелиновых волокнах серебро отлагается в перехватах Ранвье, причем захватываются также ближайшие части аксонов, отчего получаются кресты Ранвье и Фромановские поперечные линии на аксоне. В некоторых органах ляпис вводится в глубь ткани шприцем Праваца. Кроме чистого раствора ляписа (0,1—0,75%) иногда употребляют смеси, напр. 1% Arg. nitr. и 2% Ac. osmic. (Колосов). Прибавляют к нему также пикриновую и азотную кислоты. Далее кроме Arg. nitr. употребляют еще ацетаты, пикраты, лактаты серебра, протаргол и другие. В 1877 г. Гойер (Ноуег) впервые ввел аммиачное серебро. Помимо действия света для редукции можно употреблять формалин, гидрохинон и пр., а для удаления излишков—гипосульфит. Ко второй категории серебрения относятся методы с предварительной обработкой ткани. Очень многие из них удаются после универсальной фиксации формалином, особенно в соединении с резкой тканей на замораживающем микротоме. Одни из них элективно выявляют различные структурные детали, напр. аппарат Гольджи, другие же по своей детальности могут заменить такие красочные методы, как гематоксилин-эозин. При этом серебрение можно дополнить докраской (шарлах-ротом, пикрофуксином и т. д.). Для фиксации формалин берется в растворе 10—14—20%; длительность—от 3 дней. Употребляется также96%-ный алкоголь, чистый или с аммиаком (0,5—1%); также формалин с алкоголем (60%) в отношении 1:9; ацетон, ацетон пополам с формалином и ацетон с азотной к-той (10%). После формалиновой фиксации иногда употребляется пиридин или же пиридин прибавляется к раствору серебряной соли. По Шульце фиксированные в формалине ткани перед серебрением очищаются от него в растворе едкого натра. Далее перед серебрением при нек-рых методах вводятся еще вещества, сходные по действию с про- травами при красочных методах: мышьяковистая к-та, ураннитрат, танин, железные квасцы, бромистый аммоний, бромурал и др. Arg. nitr. употребляется в 1—10%-ных растворах; пользуются также аргентамином, колярголом, карбонатом, флюоридом, лактатом, нитритом серебра. Особенно ценным оказалось азотное серебро (Гойер, Fajersztajn, Белыновский). Ткани при этих методах обрабатываются и в кусочках и в замороженных срезах. Очень большое значение имеет изменение коллоидной среды. Для этой цели употребляют заливку в желатину (12,5%, 20% и 24%), или же раствор Arg. nitr. смешивается с теплым раствором желатины (1 на 1 000); употребляют еще и гуммиарабик. Для серебрения существуют самые разнообразные приемы. Напр. срезы сутки лежат в Arg. nitr., потом быстро проводятся через аммиачное серебро после легкого прополаскивания в дест. воде и потом быстро подвергаются редукции (Белыновский); или же срезы быстро проводятся через Arg. nitr., потом идет формалин, аммиачное серебро, аммиачная вода и т. д. (Гросс-Бельшовский). Кроме 20%-ного формалина для редукции употребляют еще виноградный сахар, гидрохинон, пирогаллол, адурол, галловую к-ту и др. Очень черные срезы можно ослабить 0,05%—0,2%-ным раствором цианистого калия или марганцовокислого калия. Последующее золочение срезов (на порцию воды несколько капель 1 %-ного хлорного золота) и 5%-ный гипосульфит бывают очень полезны, но не всегда обязательны. Наиболее важная часть оканчивается с редукцией. Важнейшие методы второй категории. Для нервных клеток с отростками— метод Гольджи и Кокса (см. Гольджи метод); для неврофибрил и нервных волокон—метод Рамон-и-Кахала (см. Рамои-и-Кахала методы окраски) и Белыновского. Для безмякотных нервных волокон и окончаний имеют значение еще методы Гросс-Белыновского, Шульце и Рахманова. Метод Гросс-Белыповского (модификация Лаврентьева): 1) фиксация в смеси: поровну 96%-ный спирт, 1%-ная мышьяковистая к-та и нейтральный формалин в течение часа; 2) 10%-ный нейтральный формалин—четверо суток; 3) замораживание срезов; 4) 20 %-ный Arg. nitr.—2—5 мин.; 5) 4 порции 20%-ного формалина; 6) аммиачное серебро (контроль под микроскопом); 7) аммиачная вода (²/₃ аммиака, ²/з воды)—полчаса; 8) дест. вода; 9) золочение; 10) 5%-ный гипосульфит и т. д.—Метод О. Шульце: 1) формалиновая фиксация и замораживание срезов; 2) разбавленный дест. водой нормальный раствор едкого натра (для волокон 10 на 50 воды)—сутки; 3) дест. вода—2 ч.; 4) 10%-ный Arg. nitr.—-12—24 ч.; 5) редукция: 2,5 гидрохинона, 100 см³ дест. воды и 5 см³-формалина развести в 20,180 и 120 раз (делать пробы).—Метод А. В. Рахманова: 1) фиксация 96%-ным спиртом; далее абсолютный спирт и парафин; 2) срезы на стекле держать при 37°" сутки в 10%-ном Arg. nitr.; 3) дест. вода; 4) редукция: гидрохинон 0,25, сернистокислый натрий кристаллический 2,0, углекислый калий 1,5, дест. вода 25,0. Для микроглии (мезоглии)—метод Гортега: 1) фиксация: бромистый аммоний 10,0, нейтральный формалин 70,0, дест. вода 400,0; 2) замораживание срезов; 3) дест. вода с аммиаком (на 50—2 капли); 4) аммиачное серебро: к 5 см^г 10%-ного Arg. nitr. прибавить 20 ом³ зов- 5%-ного углекислого натрия; растворить осадок крепким аммиаком, добавить 15 см³ дест. воды; 5) редукция в формалине —1 на 9 дест. воды. Методы для аргирофильных волок о н—Ачукарро (Achucarro) и Снесарева П. Е. Метод Ачукарро: 1) фиксация 10%-ным формалином; 2) замораживание срезов; 3) дест. вода; 4) насыщенный раствор Ac. tannici lev. puriss. в термостате 15 мин. при 50°; 5) дест. вода; 6) аммиачное серебро Белыновского (8 капель на 20 см^г дест. воды); 7) дест. вода-; 8) редукция: 10%-ный формалин. Для целлоид. срезов — модификация Кларфельда. — Метод Снесарева—см. Снесарева методы.—Для известковых осадко в—метод Косса: 1-— 5%-ный Arg. nitr. 30—60 мин. при дневном свете (получается фосфат серебра с последую- j щей редукцией металла). Для целей микробиологи и—методы Левадити и Янеля (см. Левадити метод).-—Необходимо заметить, что вопрос об аргентофильности волокон, клеточных зернистостей и т. п. не может еще считаться вполне выясненным. Успехи импрегнации чрезвычайно зависят не только от тканей, но и от применения указанных методов. В частности очень рискованно гистологически ди-ференцировать или отождествлять клетки по их отношению к серебрению (Hamper 1). Лит.: Enzyklopadie der mikroskopischen Technik, herausgegeben v. R. Kraus, В. Ill, p. 2 0 9 0—210 6, В. — Wien, 1927 (лит.); Hamper 1 Н., Was sind argentaffine Zellen? Virch. Arch. f. path. Anat., B. CCLХХХM, 1932.                                                                П. Снесареи.